文章摘要:目的 探讨MKN-45细胞外泌体(exosome)携带的微小RNA-552(miR-552)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和血管生成能力的影响。方法 (1)将MKN-45细胞分为MKN-45组(不转染任何质粒)、MKN-45 miR-552 inhibitor组[转染抑制miR-552表达质粒(miR-552 inhibitor)]、MKN-45 NC inhibitor组[转染对照质粒(NC inhibitor)]。提取、纯化、鉴定MKN-45细胞外泌体,采用免疫印迹法(WB)检测外泌体标志物分化抗原63(CD63)、分化抗原9(CD9)和肿瘤易感基因101(TSG101)蛋白的表达。(2)将HUVEC细胞分为HUVEC组(加入PBS溶液)、HUVEC-exo组(加入MKN-45细胞外泌体)、HUVEC-NC inhibitor-exo组(加入转染NC inhibitor的MKN-45细胞的外泌体)和HUVEC-miR-552 inhibitor-exo组(加入转染miR-552 inhibitor的MKN-45细胞的外泌体),采用外泌体示踪实验检测外泌体是否进入HUVEC细胞;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-552的表达;采用噻唑蓝(MTT)法检测HUVEC细胞的增殖情况;采用Transwell小室法检测HUVEC细胞的迁移情况;采用血管生成实验检测血管生成能力。结果 本研究成功从MKN-45胃癌细胞中提取了外泌体,透射电镜观察下外泌体均呈圆形或椭圆形,直径为100~150 nm,可见外泌体囊泡结构;WB法检测到外泌体表面表达标志物CD63、CD9和TSG101蛋白。示踪实验结果显示,MKN-45细胞来源的外泌体成功被HUVEC细胞内化。与MKN-45组和MKN-45 NC inhibitor组相比,MKN-45 miR-552 inhibitor组外泌体中的miR-552表达水平降低(P<0.05);与HUVEC组相比,HUVEC-exo组24、48和72 h的A490值较高,且迁移细胞数、小管生成节点数目和miR-552表达水平升高(P<0.05);与HUVEC-NC inhibitor-exo组相比,HUVECmiR-552 inhibitor-exo组24、48和72 h的A490值降低,且迁移细胞数、小管生成节点数和miR-552表达水平降低(P<0.05)。结论 MKN-45细胞外泌体携带的miR-552可显著促进HUVEC细胞的增殖、迁移与血管生成。
文章关键词:
论文分类号:R735.2
文章来源:《肿瘤药学》 网址: http://www.zlyxzz.cn/qikandaodu/2022/0124/1764.html